Lateral Flow Antibodies

Les tests à flux latéral sont des tests immunochromatographiques rapides en format bandelette. Sie permettent de détecter différents analytes en quelques minutes. Outre la rapidité des résultats et la simplicité d'utilisation, les avantages des tests à flux latéral sont leur faible coût et leur grande validité. Comme ils peuvent être réalisés sans infrastructure complexe, ils peuvent être utilisés de manière polyvalente en tant que tests au point d'intervention (POCT).
antibodies-online propose une large gamme d'anticorps de haute qualité adaptés à l'utilisation dans les dosages à flux latéral. Découvrez nos paires d'anticorps adaptés aux applications à flux latéral dans le tableau ci-dessous !

Paires d'anticorps à flux latéral

Qu'est-ce qu'un test de flux latéral?

Les tests à flux latéral offrent un moyen simple et rapide de tester un échantillon liquide du patient, comme le sang, l'urine, le sérum, la salive, la sueur ou d'autres liquides, pour un analyte spécifique. Le premier test à flux latéral à avoir été mis sur le marché était le test Clearblue en 1 étape, en 1988, comme test à domicile pour la détection de l'hormone de grossesse. Ces dernières années, la technologie a été utilisée avec grand succès pour la détection des maladies infectieuses, notamment le SRAS-CoV-2.

Comment fonctionne un immunodosage à flux latéral ?

Les tests à flux latéral sont une autre variante du test ELISA, dans laquelle les antigènes sont immobilisés sur une bande de cellulose ou une autre matrice appropriée. L'échantillon est déposé à une extrémité de la bandelette et les anticorps présents diffusent le long de la bandelette jusqu'à ce qu'ils atteignent le site où l'antigène correspondant est immobilisé. Les anticorps spécifiques à l'antigène se lient à l'antigène, y restent et sont rendus visibles par un anticorps de détection marqué.

Quel est le processus de développement d'un test ?

Le développement d'un test de flux latéral (LF) comprend généralement plusieurs étapes importantes. Tout d'abord, le choix d'anticorps appropriés ou d'autres molécules de liaison est essentiel, car ils déterminent la spécificité du test. Ensuite, ces biomolécules sont conjuguées à des marqueurs tels que des nanoparticules d'or colloïdales ou des molécules fluorescentes afin de permettre une détection visuelle ou assistée par un appareil. Les composants du test, y compris les biomolécules conjuguées, le tampon d'échantillon, le tampon de conjugué, la membrane et le tampon absorbant, sont assemblés sur une membrane de nitrocellulose. Enfin, les paramètres du test, tels que le volume de l'échantillon, le débit et le temps de réaction, sont optimisés afin de garantir une détection fiable et sensible de l'analyte cible.

Sélection d'anticorps pour les tests LFA

La sélection de la paire d'anticorps appropriée est une étape importante dans le développement d'un LFA. L'antigène doit être détecté avec une spécificité et une sensibilité élevées dans un échantillon souvent hétérogène. Les anticorps monoclonaux obtenus à partir d'une seule cellule B présentent une spécificité élevée pour un épitope donné sur la molécule cible et une faible réactivité croisée. Pour compenser la sensibilité moindre lorsqu'un AcM est utilisé pour la capture au lieu d'un polysaccharide, plusieurs AcM peuvent être combinés dans un seul test. La capture de différents épitopes permet d'augmenter la spécificité. Un autre avantage des AcM est leur disponibilité illimitée et la possibilité de reproduire les anticorps sans modification entre différents lots. Ils sont également mieux adaptés à la conjugaison.

Les anticorps polyclonaux ont souvent l'avantage d'être moins chers et d'avoir une plus grande affinité pour l'antigène, car ils reconnaissent différents épitopes. Cela permet également de détecter des différences dans l'antigène, par exemple des espèces différentes, des variantes ou des protéines modifiées. Mais cela peut aussi conduire à une réactivité croisée plus élevée, ce qui peut être souhaitable pour une famille de cibles ou leurs métabolites. L'inconvénient de pAbs est sa variabilité d'un lot à l'autre, car la réponse immunitaire peut varier d'un animal à l'autre et d'un saignement à l'autre. L'apport d'un anticorps polyclonal ne peut pas être garanti à vie. L'anticorps doit également être très stable pour résister aux différentes conditions auxquelles il est soumis pendant la production et le stockage des AGV.

antibodies-online propose une large gamme d'anticorps de haute qualité pouvant être utilisés dans les essais de flux latéral. Notre portefeuille se concentre sur les anticorps dirigés contre des composés du corps humain ainsi que contre divers virus. Nous proposons également des anticorps contre les champignons et les bactéries. Découvrez notre portefeuille complet ci-dessous ou utilisez le tableau des paires d'anticorps pour le flux latéral ci-dessus.
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Particules reporters pour les essais LFA

Les nanoparticules d'or sont le marqueur le plus souvent utilisé pour les tests visuels. Pour les tests à flux latéral, des particules de tailles et de formes différentes peuvent être utilisées. Les particules plus grandes peuvent donner un signal plus fort et donc augmenter la sensibilité, tout en étant moins susceptibles de traverser la membrane. Les particules d'une taille comprise entre 20 nm et 500 nm conviennent donc parfaitement. La surface d'or a une affinité naturelle pour les anticorps et autres protéines, ce qui facilite la production de conjugués.

La méthode traditionnelle de liaison des protéines à l'or colloïdal est l'adsorption passive, généralement utilisée. En utilisant différentes forces entre les molécules et les surfaces à un certain pH (par exemple les forces de van der Waals et les forces ioniques), les anticorps se lient spontanément à la surface des nanoparticules d'or. Pour garantir un chargement complet des particules, l'anticorps est généralement ajouté en excès. Cela a l'inconvénient de nécessiter plus d'anticorps pour produire les conjugués

La liaison covalente des anticorps à la surface offre une alternative. Les nanoparticules fonctionnalisées par un carboxyle sont le choix recommandé pour la production de liaisons covalentes. Grâce à la chimie d'activation du carbodiimide (EDC/Sulfo-NHS), les anticorps peuvent être liés de manière permanente à la surface de l'or colloïdal modifié par des groupes carboxyle. Sur cette surface, des unités réactives sont utilisées avec l'EDC et le Sulfo-NHS pour créer des liaisons amides qui relient l'acide carboxylique sur la nanoparticule aux amines primaires dans les résidus lysine de l'anticorps ou de la protéine. Un anticorps IgG contient généralement 80 à 100 résidus de lysine, dont environ 30 à 40 sont accessibles pour une liaison EDC/NHS. Les avantages par rapport à la liaison passive sont des conjugués plus stables, même dans des conditions difficiles. Les conjugués sont plus faciles à reproduire et moins d'anticorps sont nécessaires. La chimie de liaison covalente permet également de mieux contrôler le rapport anticorps/particule, ce qui est également important pour optimiser la sensibilité des dosages compétitifs.antibodies-online ist in der Lage, Sie bei der Entwicklung von Lateral Flow Assays zu unterstützen. Das Gold-in-a-Box™ Conjugation Kit ermöglicht eine optimale Bindung eines Antikörpers/Proteins an unsere hochkonzentrierten Naked Gold 20 nm und 40 nm Goldsole, wobei ein hohes Maß an spezifischer Aktivität erhalten bleibt, indem der pH-Wert der Goldsole leicht über dem isoelektrischen Punkt des beschichteten Antikörpers/Proteins eingestellt wird.

Kits de marquage antikörper à l'or

Lignes de contrôle pour les essais de l'ACL

Une réaction ou la présence de l'analyte doit également être détectée dans la fenêtre de contrôle en format sandwich (C), indépendamment du résultat de la fenêtre de test (T), afin de garantir le bon déroulement et la réalisation correcte du test. L'anticorps de contrôle fixé sur le tampon doit être dirigé contre l'espèce dont provient l'anticorps primaire. Cet anticorps secondaire se lie à l'anticorps primaire conjugué, ce qui entraîne un signal visible sur la ligne de contrôle. Si votre anticorps primaire conjugué provient de la souris, l'anticorps secondaire doit être dirigé contre la souris, par exemple un anticorps anti-souris de lapin. Les tests de flux latéral peuvent être utilisés de manière qualitative ou quantitative. Pour ce faire, l'intensité de la bande de l'analyte est évaluée à l'aide d'un lecteur optique.

Contrôles pour les essais LFA

Quels sont les domaines d'application des dosages à flux latéral ?

Les tests à flux latéral sont largement utilisés dans de nombreux secteurs industriels pour les tests au point d'intervention, comme la pharmacie, les tests environnementaux, la santé animale, les tests alimentaires et fourragers ainsi que la santé des plantes et des récoltes. Comme ils peuvent être réalisés indépendamment de l'équipement par des professionnels, des utilisateurs formés ou même des patients, les tests immunologiques à flux latéral ont une valeur particulière dans le domaine du diagnostic médical. Les tests à flux latéral sont les tests diagnostiques rapides les plus utilisés, c'est-à-dire des tests de diagnostic médical rapides et faciles à réaliser, qui permettent de détecter la présence ou l'absence d'un analyte cible, par exemple des agents pathogènes ou des biomarqueurs, chez l'homme ou l'animal. L'objectif définit le type de test utilisé :

Essai sandwich

Le format sandwich est souvent utilisé dans les dosages à flux latéral lorsqu'un analyte cible spécifique, par exemple une protéine ou une biomolécule, doit être détecté dans un échantillon et qu'au moins deux épitopes sont disponibles pour la liaison. Ce format est particulièrement utile si vous disposez d'un anticorps ou d'une autre molécule de reconnaissance (l'anticorps de capture) qui peut se lier spécifiquement à l'analyte cible. Le format sandwich est avantageux pour les dosages à flux latéral, car il offre une grande spécificité et permet la détection d'analytes cibles spécifiques, même dans des échantillons complexes. Un anticorps est immobilisé sur la ligne de test et le deuxième anticorps, et un deuxième anticorps est conjugué à la nanoparticule. L'intensité du signal qui en résulte est proportionnelle à la quantité d'analyte détectée dans un échantillon.

Essai compétitif

Un format compétitif dans les dosages à flux latéral est utilisé lorsque l'on souhaite détecter la présence ou la concentration d'un petit analyte cible dans un échantillon. Pour les antibiotiques ou autres petites molécules, il n'y a souvent pas assez de sites de liaison sur la molécule. Dans ce format de test, l'analyte est immobilisé sur la ligne de test et l'anticorps conjugué aux nanoparticules détecte soit l'analyte dans l'échantillon lorsque celui-ci est éliminé par rinçage (pas de signal visible = résultat positif), soit il se lie à l'analyte sur la ligne de test (signal visible = résultat négatif).

Sélection de publications Lateral Flow citant Antikörper-online

• Drogues d'abus: Plateforme quantitative de point-of-care pour l'évaluation des drogues d'abus dans l'urine, le sérum et le sang total avec ABIN723246 .¹
• Grossesse: Développement d'un lecteur portable Raman/SERS-LFA avec ABIN2143148 .²
• Influenza: Utilisation ABIN573415 pour le développement d'un test à double élément de reconnaissance et à flux latéral pour la détection multiplexe et spécifique de la souche des virus grippaux. ³
• Agent pathogène bactérien: Développement d'un capteur de flux latéral à focalisation magnétique au point d'intervention pour la détection et l'établissement de profils de bactéries pathogènes avec ABIN6391433 .⁴
• SARS-CoV-2: Test sur papier pour le dépistage rapide sur site du SRAS-CoV-2 dans des échantillons cliniques avec ABIN6990129 .⁵
• Maladie de Lyme: Développement d'un test de diagnostic immunologique multiplexe au point d'intervention pour la détection d'anticorps dans les sérums humains par empilement vertical de couches de papier fonctionnelles en utilisant des ABIN964717 .⁶

Objectifs importants dans le développement de dosages à flux latéral

Références

Julian Pampel, BSc

Content Manager at antibodies-online.com

Creative mind of antibodies-online with a keen eye for details. Proficient in the field of life-science with a passion for plant biotechnology and clinical study design. Responsible for illustrated and written content at antibodies-online as well as supervision of the antibodies-online scholarship program.

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