Western blotting fluorescent
Le Western blotting fluorescent peut offrir de nombreux avantages et améliorer la technique très robuste du Western blotting. Le Western blotting fluorescent est une méthode de plus en plus populaire car elle permet une détection quantitative puissante de l'expression des protéines.
Le principe de base de cette méthode est que la force de la fluorescence d'un fluorophore lié à un anticorps de détection est proportionnelle à la force de l'expression des protéines. Étant donné que la fluorescence ne se produit pas de manière enzymatique, comme c'est le cas avec le Western blotting classique, la quantification est beaucoup plus reproductible. La méthode de détection de l'expression de la protéine est une méthode d'analyse de l'expression.
Figure 1. Westernblotting fluorescent : 1. Le secondaire conjugué à un fluorophore reconnaît l'anticorps primaire lié à la protéine d'intérêt. 2. Une source de lumière est utilisée pour exciter le conjugué fluorescent jusqu'à la fluorescence. 3. Le colorant excité émet une lumière d'une longueur d'onde spécifique, qui peut être visualisée par imagerie numérique. Ainsi, la protéine d'intérêt peut être détectée quantitativement.
Western Blotting fluorescent contre Western Blotting chimiluminescence
| Détection par chimioluminescence | Détection par fluorescence | |
|---|---|---|
| Source du signal | Signal provenant d'une réaction enzymatique | Signal provenant d'un fluorophore |
| Détection | Film photographique, instrument d'imagerie | Instrument d'imagerie avec source lumineuse et filtres |
| Sensibilité | Bonne, grande variété de substrats disponibles | Bonne, grande variété de fluorophores disponibles |
| Quantification | Simple canal, normalisation difficile | Multiples canaux, normalisation plus facile |
| Durée du signal | Minutes à heures | Des semaines à des mois |
Tampon bloquant pour Western blotting fluorescent
- Conçu pour le western blotting en utilisant des anticorps conjugués à un fluorochrome.
- Consiste en une formulation protéique exclusive dans une solution saline tamponnée TRIS à pH 7,6 avec du thimérosal.
- Réactifs ultra purs dissous dans de l'eau de qualité pharmaceutique.
- Le tampon de blocage de Western Blot est idéal pour le Western Blot à l'infrarouge.
- Ce produit est une solution mère concentrée 2X. Préparer une solution de travail 1X en diluant 1 part de concentré 2X avec 1 part de TBS ou équivalent.
- Filtré à travers un filtre Millipore de 0,22 micron.
Kits de Western blotting fluorescents Multiplex Duo
Les kits de Western blotting fluorescents Multiplex Duo sont adaptés à la détection et à la quantification simultanées de populations de protéines spécifiques dans un échantillon biologique. En utilisant une combinaison de deux anticorps sélectionnés pour une réactivité croisée minimale, la méthode de détection fluorescente permet une analyse quantitative simultanée de plusieurs protéines au sein d'un même échantillon sur le même blot.
Figure 2. Kits de Western Blotting Fluorescent Multiplex Duo : Détection simultanée de l'α-tubuline et de la GFP sur un seul blot en utilisant des conjugués d'anticorps secondaires marqués. Le sondage des lysats cellulaires et de la GFP avec des anticorps anti-α-tubuline de souris et anti-GFP de poulet, suivi par des conjugués 649 IgG de chèvre anti-souris (pseudo-couleur vert) et 800 IgG de chèvre anti-poulet (rouge), puis imagé à l'aide du système d'imagerie G:BOX de Syngene a donné lieu à des schémas de détection comparables.
| Nom / Lien vers le produit | Canaux de fluorescence | Réactivité |
|---|---|---|
| DyLight™ Multiplex 488/800 Duo Western Blot Kit | 488 / 800 nm | Souris, lapin |
| Kit Western Blot DyLight™ Multiplex 549/800 Duo | 549 / 800 nm | Souris, lapin |
| Kit Western Blot DyLight™ Multiplex 649/488 Duo | 649 / 488 nm | Souris, lapin |
| Kit Western Blot DyLight™ Multiplex 649/549 Duo | 649 / 549 nm | Souris, lapin |
| DyLight™ Multiplex 649/800 Duo Western Blot Kit | 649 / 800 nm | Souris, lapin |
Kits Western Blot fluorescents Trio multiplex
Le kit de Western blot multiplex Trio fluorescent est adapté à la détection et à la quantification simultanées de populations de protéines spécifiques dans un échantillon biologique. En utilisant une combinaison de trois anticorps sélectionnés pour une réactivité croisée minimale, la méthode de détection par fluorescence permet une analyse quantitative simultanée de plusieurs protéines au sein d'un même échantillon sur le même blot.
| Nom / Lien vers le produit | Canaux de fluorescence | Réactivité |
|---|---|---|
| DyLight™ Multiplex 649/488/800 Trio Western Blot Kit | 649 / 488 / 800 nm | Poulet, Souris, Lapin |
| DyLight™ Multiplex 649/549/800 Trio Western Blot Kit | 649 / 549 / 800 nm | Poulet, Souris, Lapin |
Anticorps secondaires conjugués DyLight™
Anticorps secondaires conjugués HRP TrueBlot®
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