ELISA Introduction

Introduction

Les tests ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assays) font partie des tests protéomiques en laboratoire les plus courants utilisés aujourd'hui. Le test ELISA est né d'une conception plus ancienne, le Radiometric Immuno-Assay. L'IRA utilise des réactifs radioactifs, qui présentent un risque important pour la santé et la sécurité humaines s'ils ne sont pas manipulés correctement. Les premiers tests ELISA ont été développés pour contourner ce danger et créer une alternative rapide, simple et sûre. Si les RIA sont encore utilisés dans certains contextes, ils ont été largement remplacés par le test ELISA, plus sûr et moins exigeant sur le plan technique. Comme son prédécesseur, le test ELISA est une méthode à base d'anticorps conçue pour détecter quantitativement ou qualitativement un analyte spécifique dans un échantillon. Les analytes analysés par la méthode ELISA sont généralement (mais pas nécessairement) des protéines, et les types d'échantillons peuvent aller des fluides biologiques bruts (par exemple, plasma, sérum, urine, sueur) aux milieux de culture cellulaire raffinés ou aux protéines recombinantes purifiées en solution.

Bien qu'il existe de nombreux types d'ELISA, le principe de base de ce test est étonnamment simple : des anticorps conjugués à une enzyme (le plus souvent une peroxydase) sont liés à un analyte qui a été immobilisé sur un support solide (généralement une plaque de microtitration à 96 puits). L'échantillon est lavé, et tout anticorps non lié est éliminé par rinçage. Un substrat chromogène incolore est ensuite introduit, et le conjugué enzymatique catalyse une réaction qui transforme le substrat incolore en un dérivé de couleur foncée. Le changement de couleur est utilisé pour confirmer la présence de l'analyte dans un essai qualitatif, et dans un essai quantitatif, le degré de changement colorimétrique peut être comparé au changement observé à partir d'un ensemble de normes de concentration connues pour estimer la quantité d'analyte présente.

Un test ELISA est-il le bon test pour moi ?

Le test ELISA est réputé pour être un test rapide, simple et précis qui permet la détection quantitative ou qualitative d'un analyte dans un échantillon. Il y a quelques critères à prendre en compte pour décider si le test ELISA est compatible avec l'objectif que vous poursuivez. Pour être un candidat viable à l'utilisation d'un test ELISA, un analyte et un échantillon doivent répondre au moins aux critères de base suivants :

• L'analyte doit pouvoir être reconnu par un anticorps.
• L'analyte doit être présent dans un échantillon aqueux d'un volume approprié. (Généralement 50-200μL après dilution).
• L'échantillon ne doit contenir aucune substance susceptible d'interférer avec la reconnaissance des antigènes ou la détection colorimétrique.
• L'analyte doit se trouver en quantité suffisamment importante dans l'échantillon pour que la détection soit possible.

En plus de savoir quels types d'échantillons sont compatibles avec le test ELISA, il est également utile de savoir quels types d'échantillons sont incompatibles avec le format ELISA. Les types d'échantillons ou les analytes peuvent être incompatibles avec le format ELISA pour diverses raisons techniques. Voici quelques exemples de qualifications qui rendraient traditionnellement un échantillon incompatible avec le format ELISA :

• Analytes qui ne sont présents qu'à l'état de traces dans un échantillon.
• Analytes pour lesquels la génération d'anticorps est non triviale. (Par exemple, les très petites molécules)
• Les échantillons qui contiennent des détergents, des acides forts ou des bases fortes.
• Les échantillons contenant des pigments de couleur sombre qui peuvent tacher une plaque de microtitration ou un support solide similaire.

Le test ELISA présente de nombreux avantages. C'est un test rapide, scalable et spécifique, ce qui en fait un outil puissant et indispensable dans la boîte à outils du chercheur. Les résultats obtenus peuvent être qualitatifs, semi-quantitatifs ou entièrement quantitatifs (en fonction de la conception du test effectué). La technique ELISA est profondément ingénieuse dans sa simplicité, une fois qu'un dosage individuel est optimisé, un technicien peu formé peut généralement analyser entre 100 et 200 échantillons par ELISA en quelques heures seulement. Les normes et les échantillons sont généralement analysés en double (au moins), ce qui fait du test ELISA un test assez robuste et plus tolérant aux erreurs de l'utilisateur ou aux variations stochastiques des échantillons que de nombreuses autres méthodes.

Pourtant, le test ELISA n'est pas sans limites. La nature fondamentale d'un ELISA limite un seul test à la détection d'une seule cible. Étant donné que le test dépend de la liaison de l'analyte par un anticorps, un ELISA ne peut pas faire la distinction entre des analytes antigéniquement identiques (différentes cibles reconnues par le même anticorps). Par exemple, le même test ELISA reconnaîtra souvent plusieurs ou toutes les différentes isoformes d'une même protéine dans un échantillon. Ce test nécessite également la disponibilité d'un équipement spécialisé, tel qu'un lecteur de microplaques spectrophotométrique, pour réaliser correctement le test. Le format ELISA est également le plus rentable lorsque l'on analyse de nombreux échantillons. Un seul kit de 96 tests permet généralement de doser 40 échantillons en double ainsi qu'une courbe standard de 8 échantillons. De nombreux chercheurs trouvent le coût d'un kit ELISA prohibitif pour les petites études portant sur une poignée d'échantillons seulement.

Les principaux inconvénients associés à l'ELISA ont été largement atténués par les progrès de la technologie. Aujourd'hui, la plupart des institutions de recherche universitaires et privées possèdent les lecteurs de plaques spécialisés et les autres équipements nécessaires pour réaliser les différentes étapes d'un ELISA. En outre, la concurrence sur le marché a fait baisser le prix des kits ELISA préfabriqués, qui offrent généralement un meilleur rapport qualité-prix par échantillon analysé que de nombreuses autres méthodes protéomiques courantes. Cependant, il faut toujours examiner attentivement son choix de conception expérimentale et peser les forces et les faiblesses du format ELISA par rapport à toutes les options lors de la décision vitale concernant les techniques à exploiter.

Construire un essai, ou acheter un kit ?

Une fois que vous avez décidé d'utiliser un test ELISA, vous devez décider si vous allez utiliser un kit ELISA disponible dans le commerce, ou essayer de compiler un test par vous-même à partir de zéro. Il y a quelques raisons pour lesquelles on peut vouloir essayer de générer un essai de novo plutôt que d'acheter une solution préfabriquée. Si vous avez besoin d'affiner votre test en dehors des spécifications d'un kit disponible dans le commerce, si vous avez besoin d'un contrôle étroit sur la nature spécifique des composants qui entrent dans votre test, ou si vous avez besoin d'utiliser un anticorps spécifique ou personnalisé dans votre test, vous pourriez envisager d'investir le temps et les efforts nécessaires pour générer un test de novo.

Cependant, si vous n'êtes pas limité par les critères ci-dessus, vous pourriez envisager d'acheter un test disponible dans le commerce pour des raisons de simplicité. Vous devriez envisager d'acheter un kit préfabriqué si vous le souhaitez :

• Gagner du temps : L'optimisation des tests ELISA personnalisés prend beaucoup de temps. Même pour un scientifique expérimenté disposant de réactifs compatibles, un nouveau test nécessitera généralement des heures ou des jours d'optimisation avant d'être prêt à être utilisé. C'est autant de temps que vous pourriez utiliser pour collecter, analyser, interpréter et publier vos données. Considérez attentivement la valeur de votre temps, ainsi que le temps des techniciens et des étudiants qui construiront et réaliseront le dosage.
• S'assurer de la compatibilité des réactifs : Un kit ELISA préfabriqué est garanti pour contenir des réactifs compatibles entre eux. Lorsque vous compilez votre propre test, même si vous choisissez des réactifs de haute qualité, vous pouvez accidentellement tomber sur des produits incompatibles (par exemple, deux anticorps qui reconnaissent un épitope similaire et qui se bloquent mutuellement en raison de l'encombrement stérique).
• Éviter les problèmes frustrants de contrôle de la qualité : Lorsque vous réalisez un essai à partir de zéro, vous vous approvisionnerez probablement en réactifs différents provenant de plusieurs endroits différents. Et après avoir passé tout le temps nécessaire pour traquer chacun des divers réactifs dont vous avez besoin, même un seul mauvais tampon pourrait ruiner votre expérience, nécessitant d'innombrables heures de dépannage pour retrouver la source du problème. En revanche, chaque kit ELISA préfabriqué d'antibodies-online est couvert par notre garantie de remboursement. Dans le cas improbable où vous rencontreriez un problème, notre équipe d'assistance technique se chargera du dépannage.
• Économisez de l'argent : Bien qu'il puisse être tentant d'essayer d'assembler votre propre ELISA pour économiser quelques dollars, la plupart des chercheurs constatent que l'analyse coûts-avantages ne s'additionne pas vraiment au final. Après avoir considéré tous les différents composants qui doivent être achetés pour générer un dosage de novo, il est souvent tout aussi rentable d'acheter un kit préfabriqué.

Que vous ayez choisi d'acheter l'un de nos kits ELISA prêts à l'emploi ou de développer votre propre test à partir de zéro, vous voudrez probablement en savoir un peu plus sur les différents modèles de tests disponibles et courants. Pour en savoir plus sur les différents formats ELISA qui sont couramment disponibles chez antibodies-online, veuillez consulter An Introduction to ELISA (Part 2).

Quels sont les avantages de l'utilisation des kits ELISA ?

Pour réaliser un test ELISA, vous avez besoin de plusieurs matériels. Une plaque à 96 puits pré-enduite, plusieurs diluants, une solution d'arrêt, un standard à tester, un substrat afin de générer la réponse colorée, des réactifs de détection et un tampon de lavage. Cela permet de gagner du temps par rapport au rassemblement de tous les matériaux et au mélange des solutions avant chaque essai. Les kits ELISA constituent une approche pratique pour réaliser le test ELISA souhaité. Le kit est livré dans une boîte contenant tous les réactifs nécessaires en une seule fois - pas besoin d'acheter quoi que ce soit en plus.

Save working time

The kit comes in a box containing all of the necessary reagents.

Ensure compatibility

Components are tested and have been proven compatible with each-other.

Avoid quality issues

Reagents of reliable quality: All products are covered by our money-back guarantee.

Save money

The cost-per-sample is generally lower than for de novo assay generation.

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